El agar TSI es un medio diferencial que determina tanto la fermentación de los hidratos de carbono como la producción de ácido sulfihidrico. Las bacterias pueden utilizar cualquiera de los sustratos incorporados en el medio y ser metabolizados, características que son utilizadas para la diferenciación de estas, principalmente para las enterobacterias.
Este medio contiene lactosa en una concentración de 1% y glucosa 0.1%, lo cual permite la observación de la fermentación de uno o de ambos carbohidratos por parte de las bacterias, ademas de la producción de gas y de ácido sulfhidrico. La fermentacion es un proceso que se lleva acabo en condiciones aerobicas (pico de flauta) y anaerobica (fondo). En el pico de flauta la glucosa (monosacarido) es catabolizada inicialmente por medio del ciclo anaerobico de Embden-Meyerhof, utilizado tanto por los aerobios como por los anaerobios para dar ácido pirúvico y posteriormente este sera degradado a traves del ciclo de Krebs para dar CO2, H2O y energia.
En el medio de cultivo, el extracto de carne y la pluripeptona, aportan los nutrientes adecuados para el desarrollo bacteriano. La lactosa, sacarosa y glucosa son los hidratos de carbono fermentables, el tiosulfato de sodio es el sustrato necesario para la producción de ácido sulfhidrico, el sulfato de hierro y amonio es la fuente de iones Fe3+, los cuales se combinan con el ácido sulfhidrico y producen sulfuro de hierro, de color negro. El rojo fenol es el indicador de pH, y el cloruro de sodio mantiene el balance osmótico.
Fórmula (en gramos por litro)
| Instrucciones | |
Extracto de carne
|
3.0
|
Suspender 62,5 g del polvo por litro de agua destilada. Mezclar bien y calentar con agitación frecuente, hervir 1 o 2 minutos hasta disolución total. Llenar hasta la tercera parte de los tubos de ensayo. Esterilizar a 121°C por 15 minutos. Enfriar en pico de flauta profundo.
|
Pluripeptona
|
20.0
| |
Cloruro de sodio
|
5.0
| |
Lactosa
|
10.0
| |
Sacarosa
|
10.0
| |
Glucosa
|
1.0
| |
Sulfato de hierro y amonio
|
0.2
| |
Tiosulfato de sodio
|
0.2
| |
Rojo de fenol
|
0.025
| |
Agar
|
13.0
| |
pH final: 7.3 ± 0.2
| ||
SIEMBRA
El medio se sirve en tubo de ensaye, y se realiza estrías por agotamiento,su incubacion se realiza de 35-37ºC durante 24 hrs en aerobiosis.
RESULTADOS
1. Pico alcalino/fondo ácido (pico rojo/fondo amarillo): el microorganismo solamente fermenta la glucosa.
2. Pico ácido/fondo ácido (pico amarillo/fondo amarillo): el microorganismo fermenta glucosa, lactosa y/o sacarosa.
3. Pico alcalino/fondo alcalino (pico rojo/fondo rojo): el microorganismo es no fermentador de azucares.
4. La presencia de burbujas, o ruptura del medio de cultivo, indica que el microorganismo produce gas.
5. El ennegrecimiento del medio indica que el microorganismo produce ácido sulfhidrico.
A: Reacción ácido (color amarillo).
K: Reacción alcalina ( color rojo-naranja).
A/A: Fermentación de los tres azucares (glucosa, lactosa y sacarosa).
K/A: Fermentación de la glucosa.
K/K: No hay fermentación de la glucosa, lactosa ni sacarosa.
Precipitado negro: Formación de ácido sulfihidrico.
Burbujas: `Presencia de gas.
PRACTICANDO CON EL TSI
*Primero lo que hicimos fue pesar 6.25g del agar.
*Los colocamos dentro del matraz y agregamos los 100ml de agua destilada.
*Después se agita vigorosamente, sin dejar que queden grumos.
*Posteriormente se colocaba en la parrilla de calentado, para que hirviera, después de que el hervor rompa, se debe dejar en ese estado durante un minuto.
*Después se sirve en tubo de esnaye pero este se llena solamente hasta una tercera parte.
Pues como podemos observar en nuestras fotografaias, al parecer el fondo del medio (ácido) torno a un color naranja, y presentaba pico color rojo (alcalino), lo que quiere decir que el microorganismo fermento solamente la glucosa. También observamos que hubo crecimiento de colonias en las estrías trazadas.
No hay comentarios:
Publicar un comentario