Medio de cultivo frecuentemente usado en microbiologia de alimentos para la diferenciación de enterobacterias, en base a la fermentación de glucosa, y lactosa y a la producción de ácido sulfhídrico.
En el medio de cultivo, la peptona de carne y la tripteina, aportan los nutrientes adecuados para el desarrollo bacteriano, la lactosa y la glucosa son los hidratos de carbono fermentables, el tiosulfato de sodio es el sustrato necesario para la producción de ácido sulfhídrico, el citrato de hierro y amonio, es la fuente de iones Fe3+, los cuales se combinan con el ácido sulfhídrico y producen sulfuro de hierro, de color negro. El rojo de fenol es el indicador de pH, y el cloruro de sodio mantiene el balance osmótico. El agar es el agente solidificante. Por fermentación de azucares, se producen ácidos, que se detectan por medio del indicador rojo de fenol, el cual vira al color amarillo en medio acido. El tiosulfato de sodio se reduce a sulfuro de hidrógeno el que reacciona luego con una sal de hierro proporcionando el típico sulfuro de hierro de color negro.
Fórmula (en gramos por litro)
| Instrucciones | |
Peptona de carne
|
13.0
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Suspender 54.8 g del polvo por litro de
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Cloruro de sodio
|
5.0
| |
Lactosa
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10.0
| |
Tripteina
|
10.0
| |
Glucosa
|
1.0
| |
Citrato de hierro y amonio
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0.5
| |
| Tiosulfato de sodio |
0.3
| |
| Rojo de fenol |
0.025
| |
Agar
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15.0
| |
pH final: 7.3 ± 0.2
| ||
SIEMBRA
La siembra se realiza por picadura en el agar y estría en la superficie inclinada. Se incuban de 18 a 24 horas y de 35 a 37ºC son condiciones aerobias, se debe esterilizar en autoclave a 121ºC.
RESULTADOS
1.Pico alcalino/fondo ácido (pico rojo/fondo amarillo): el microorganismo solamente fermenta glucosa.
2.Pico ácido/fondo ácido (pico amarillo/fondo amarillo): el microorganismo fermenta glucosa, y lactosa.
3.Pico alcalino/fondo alcalino (pico rojo/fondo rojo): el microorganismo es no fermentador de azucares.
4.La presencia de burbujas, o ruptura del medio de cultivo, indica que el microorganismo produce gas.
5.El ennegrecimiento del medio indica que el microorganismo produce ácido sulfhídrico.
A: Ácido
K: Alcalino.
Microorganismo
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Pico/Fondo
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Producción de gas
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Producción de
ácido sulfhídrico
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E. coli ATCC 25922
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A/A
|
+
|
-
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K. pneumoniae ATCC700603
|
A/A
|
+
|
-
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P. mirabilis ATCC 43071
|
K/A
|
+
|
+
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S. typhimurium ATCC 14028
|
K/A
|
-
|
+
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S. enteritidis ATCC 13076
|
K/A
|
+
|
+
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S. flexneri ATCC 12022
|
K/A
|
-
|
-
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P. aeruginosa ATCC 27853
|
K/K
|
-
|
-
|
Se debe examinar la parte superior e inferior del medio y valorar la coloración.
a) En el extremo superior
Rojo- No fermentan lactosa, sacarosa o ambas.
Amarillo- Fermenta lactosa, sacarosa o ambas.
El color amarillo indica un pH bajo debido a la producción de ácidos en grandes cantidades por la fermentación de la lactosa y/o sacarosa. Si la bacteria no fermenta lactosa y/o sacarosa la producción de ácidos es nula o, en caso de las enterobacterias, mínima (ya que todas fermentan la glucosa, generando ácidos en pequeñas cantidades) aunque no lo suficiente para contrarrestar la alcalinidad del medio, la cual se manifiesta con un intenso color rojo.
b)Extremo inferior
Rojo- Sin fermentación, la bacteria es un aerobio obligado.
Amarillo- Fermentación, la bacteria es un aerobio facultativo.
Negro- Producción de ácido sulfhídrico.
Grietas, burbujas o elevación del medio- Producción de gas.
Explicación: La coloración sigue el mismo patrón, indicando el pH en base a la fermentación de carbohidratos. Las presencia de un color rojo a este nivel, no solo nos dice que la bacteria no fermenta lactosa y sacarosa, ademas es indicativo de que no fermenta glucosa y por tanto necesita oxigeno para oxidar estos carbohidratos y obtener energía de ellos, siendo así un microorganismo aerobio obligado.
La presencia de coloración amarilla nos indica fermentación de carbohidratos aunque sea solo de glucosa ( si el otro extremo es rojo) y esta función metabólica es típica de anaerobios facultativos.
La bacteria puede reducir el SO4 (sulfato ferroso) a H2S (ácido sulfhídrico), este se combinara con el Fe (hierro) para formar FeS (sulfuro de hierro) el cual proporciona un aspecto negro al extremo inferior. La producción de gas dentro del agar provocara grietas, burbujas o levantamiento del medio hacia arriba.
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