TINCION DE GRAM

Gram  Positivas.

La Tincion de Gram es una técnica de laboratorio que se utiliza rutinariamente en los estudios microbiológicos de las bacterias.

La técnica se basa en aplicar una serie de colorantes a una muestra de cualquier origen (esputo, orina, pus, etcétera) que supuestamente contenga bacterias no identificadas. Los colorantes tiñen la pared de las bacterias de color morado y, tras unos minutos, se realiza un lavado del colorante. Después de eso puede que el colorante permanezca en la pared bacteriana o que se haya ido. En el primer caso permanecería el color morado, y se trataría de bacterias Gram positivas y, en el segundo, la pared tendría un color rosado, y serían Gram negativas.

Gram Negativas.

El primer paso para realizar este proceso es realizar el frotis.

a) Se toma una pequeña muestra con el asa de platino.

b) Se fija el frotis flameando suavemente el portaobjeto por la llama del mechero.

c) Se cubre el frotis con un colorante.

d)Lavar el frotis con agua destilada o corriente.

e) Se seca suavemente con un papel absorbente.

f) Se observa al microscopio, enfocando en primer lugar con el objetivo del menor aumento y luego con el de mayor aumento, utilizando aceite de inmercion.

g) Dibujar lo observado y registrar la forma de la célula y el tipo de agrupación que esta presente.

Pasos para realizar la tincion de gram

I. Primero se cubre el frotis con 2 gotas de cristal violeta de 30 segundos a 1 minuto.

II. Después se lava el frotis con agua, en forma cuidadosa, para eliminar el exceso de colorante.

III. Se cubre el preparado con 2 gotas de lugol, durante 30 segundos.

IV. Se lava cuidadosamente el frotis con agua.

V. Después se cubre el frotis con alcohol al 95% durante un minuto  (procurando inclinar el portaobjeto y aplicar gota a gota, dejando que escurra hasta que no fluya mas la tinta).

VI. Luego se lava el frotis con agua inmediatamente.

VII. Se cubre el frotis con safranina aproximadamente 2 gotas durante 30 segundos.

VIII. Hay que lavar nuevamente con agua, eliminando cuidadosamente el exceso de agua.

IX. Secar suavemente con toalla,absorbente y dejar secar al aire.

X. Observar el frotis al microscopio, enfocando con el objetivo de bajo aumento, hasta llegar al de inmercion.

XI. Dibujar y registrar las observaciones realizadas en el frotis, como el tipo de coloración, forma y agrupación celular.

En esta dirección podemos encontrar mas información. https://www.dropbox.com/s/roa6ka1m1e3ywly/Preparaci%C3%B3n%20del%20frotis%20TINCI%C3%93N%20DE%20GRAM..pptx?dl=0