Es un medio selectivo para el aislamiento y diferenciación presuntiva de estafilococos, en base a la producción de pigmentos, la fermentación de manitol y la hidrólisis de gelatina, a partir de alimentos y otras muestras.
En el medio de cultivo, el extracto de levadura y la tripteina aportan los nutrientes para el desarrollo de microorganismos, la gelatina es el sustrato de la enzima gelatinasa. La lactosa y el manitol son los hidratos de carbono fermentables. El cloruro de sodio, se encuentra en alta concentración, para inhibir el desarrollo de la flora acompañante, lográndose así un medio selectivo para el desarrollo de estos microorganismos.
Fórmula (en gramos por litro)
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Instrucciones
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Extracto de levadura
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2.5
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Suspender 149 g del medio en un litro de agua destilada. Reposar 5 minutos y mezclar calentando a ebullición durante 1 o 2 minutos. Esterilizar en autoclave durante 15 minutos a 121°C. Verter en placas y mezclar para dispersar el precipitado.
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Tripteína
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10.0
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Gelatina
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30.0
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Lactosa
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2.0
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D-Manitol
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10.0
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Cloruro de sodio
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75.0
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Fosfato dipotásico
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5.0
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Agar
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15.0
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pH final: 7.0 ± 0.2
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SIEMBRA
Directa, en superficie, por estriado o por extensión, mediante estrías continuas o por agotamiento.
La incubación es de 48 horas a 35-37ºC en aerobiosis.
RESULTADOS
Observar las características de las colonias y realizar las pruebas de identificación de microorganismos.
1. Fermentación de manitol: Agregar unas gotas de purpura de bromocresol a las zonas donde se encuentran las colonias sospechosas y en una zona d la placa donde no hay desarrollo bacteriano, comparar el color desarrollado entre las dos zonas.
Prueba positiva: cambio de color del indicador del medio en la zona de crecimiento bacteriano.
Prueba negativa: no hay diferencias de color entre las zonas de crecimiento bacteriano.
2. Hidrólisis de la gelatina: cubrir la placa 5ml de una solución saturada de sulfato de amonio y colocar en estufa, a 35-37ºC en aerobiosis.
Positiva. halo transparente alrededor de las colonias.
Negativa: Ausencia de este halo transparente.
Microorganismo
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Pigmento
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Fermentación de manitol
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Hidrólisis de la gelatina
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Prueba de la coagulasa
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S. aureus ATCC 25923
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+
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+
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+
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+
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S. aureus ATCC 6538
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+
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+
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+
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+
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S. epidermidis ATCC 14990
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+
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PRACTICANDO CON EL ESTAFILOCOCO 110
*Lo que realizamos primero fue prepara la muestra que íbamos a estudiar (cebolla y cilantro de la cafetería).
*Trituramos la muestra en un mortero, y le colocamos gua destilada.
*Posteriormente esto se filtro con ayuda de una gasa y un embudo y se coloco en un tubo de ensaye.
*El medio ya se había prepara, así como se habían preparado todos los medios anteriormente.
*Después se inoculo la muestra en el medio por medio de estrías por agotamiento en toda la caja.
Después de haber dejado incubando nuestro material, al observarlo, notamos que habían pequeñas colonias, de color blanco incoloro, que tenían pequeñísimos halos en sus orillas, tenían una elevación convexa, y tenían forma circular. Por lo que podríamos deducir que la muestra fue negativa en la hidrólisis de la gelatina.
*También le realizamos la prueba de coagulasa y catalasa.
COAGULASA
*Tomamos plasma de sangre que ya había sido centrifugada, y posteriormente inoculamos la bacteria ahí con ayuda del asa, y después se llevo al baño maría, para después obtener la muestra y al estudiarla, nuestra prueba coagulasa salio negativa.
CATALASA
*Aquí colocamos una muestra de la colonia en un portaobjeto y después le agregamos una gota de agua oxigenada, para ver si era positiva, lo cual si ocurrió, y nos dio positiva.
